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                         Anaerobios , son bacterias que requieren tensión de oxígeno reducida para su crecimiento, no se desarrollan en la superficie de medios de cultivo en atmósferas de aire normal ( aerobiosis) ni en ambientes con 10% de CO2 ( microaerofilia). Solamente se desarrollan en atmósferas anaerobias con 5-10% de H2, 5-10% CO2 y 80-90% de N2.

Los gérmenes  anaerobios constituyen la mayor parte de la flora normal de piel, membranas mucosas, y tracto intestinal. En el colon las enterobacteriáceas presentes en la flora normal son superados en número por los anaerobios en un rango al menos de 1:1000. La flora anaerobia fisiológica del colon juega un papel determinante en la resistencia del organismo a la colonización por flora patógena. Por lo tanto los anaerobios son beneficiosos para el huésped. 

 Sin embargo, los anaerobios pueden causar infecciones severas , incluso letales en humanos.  La mayoría de estas infecciones son de naturaleza endógena , aparecen al colonizar éstas los sitios normalmente estériles del organismo, y se producen al perder la integridad de las estructuras de superficie del organismo.      Menos  frecuentes son las infecciones por anaerobios adquiridas en forma exógena. Ejemplos clásicos son el tétano, botulismo, e infecciones nosocomiales a Clostridium.       Las infecciones producidas por anaerobios son comunes en ocurrencia, en promedio el 5 a 10% de los gérmenes gram negativos aislados de hemocultivos son anaerobios miembros de la familia Bacteroidaceae.

El conocimiento de los mecanismos de patogenia de los anaerobios es incompleto. Normalmente se encuentran en infecciones polimicrobianas, ya sea  acompañados de otros anaerobios o en asociación a organismos aeróbicos. Si embargo, infecciones ( sepsis) monomicrobianas se pueden detectar a Clostridium  y bacilos gram negativos anaerobios.

La importancia clínica de estas infecciones se ha demostrado por las terapias antimicrobianas que no toman en cuenta la flora anaerobia en infecciones con etiología a anaerobios. Por lo tanto, el cultivo de anaerobios es esencial para la evaluación satisfactoria de las muestras clínicas .

 

CONSIDERACIONES CLÍNICAS:  Infecciones a anaerobios pueden producirse en cualquier sitio del organismo como: abscesos cerebrales, infecciones dentales, otitis crónica, mastoiditis, sinusitis, tonsilitis, neumonia por aspiración, neumonitis necrotizante, abscesos pulmonares, empiemas, endocarditis, abscesos mamarios, abscesos hepáticos, infecciones a heridas, peritonitis, abscesos retroperitoneales, apendicitis, abortos sépticos, uretritis, prostatitis, abscesos perianales, osteomielitis, celulitis, fascitis necrozante, gangrena gaseosa.

Un número de factores predisponen para la ocurrencia de dichas infecciones. Debido a que los anaerobios se encuentran en grandes números en todas las superficies mucosas , esta flora endógena generalmente es la fuente de infección, especialmente en  sitios cerca de las superficies. Heridas accidentales o quirúrgicas se contaminan fácilmente con estas bacterias, y puede llevar a infección. Una reducción del oxígeno del tejido dañado por hemostasis, necrosis, implantación de cuerpos extraños, diabetes , etc., facilita la colonización por organismos anaerobios.  Infecciones por gérmenes aerobios que bajan el potencial redox de los tejidos dañados pueden servir al mismo propósito.  Todos los tipos de inmunosupresión pueden agravar las infecciones a anaerobios.

Los signos clínicos de infecciones a anaerobios son comúnmente infecciones cercanas a las superficies mucosas, necrosis tisular, y formación de abscesos. Aminas volátiles y ácidos grasos de cadena corta producidos por los gérmenes anaerobios son la causa del mal olor presente en las heridas o secreciones . La formación de gas en las lesiones es menos específico, a no ser el cuadro clásico de mionecrosis clostridial o gangrena gaseosa. Infecciones  producidas por anaerobios pigmentados como Porphyromonas o Prevostella pueden producir coloración negra de las secreciones . Finalmente en algunos tipos de infecciones siempre debe sospecharse su etiología por lo menos en parte a anaerobios como por ejemplo abscesos cerebrales, pulmonares o hepáticos, neumonia por aspiración, y peritonitis.

 

RECOLECCION Y TRANSPORTE DE MUESTRAS CLÍNICAS:   Las muestras clínicas deben ser obtenidas del sitio infectado usando procedimientos que garanticen el mantenimiento de una atmósfera carente de oxígeno y eviten contaminación con flora endógena. En general el procedimiento recomendado es aspiración con aguja del material purulento o por biopsia después de desinfección apropiada. Estas muestras deben ser procesadas en el laboratorio dentro de las 24 hrs. Siguientes. Obtención de muestras con torundas son apropiadas solamente en casos de incluir un medio de transporte apropiado para anaerobios y sean  sembradas ántes de 30 minutos de obtenida la muestra.  Las muestras para cultivos anaeróbicos nunca deben ser refrigeradas.

MICROSCOPÍA: Se recomienda efectuar una tinción de gram a la muestra para observar morfología bacteriana como antecedente preliminar al cultivo.

 

TECNICAS DE CULTIVO: Se sugiere que todas las muestras clínicas provenientes de sitios probables de ser colonizados por anaerobios sean cultivadas en medios para anaerobios .

Los medios de aislamiento primario requieren de medios de cultivo líquidos y sólidos, el medio tioglicolato suplementado con Vit K, hemina y bicarbonato es ampliamente aceptado porque no requiere de incubación anaeróbica.  En cuanto a los medios sólidos un número de diferentes formulaciones cumplen con las especificaciones requeridas como son: Agar Sangre+Suplementos, Agar Schaedler, Agar Brucella, Agar Sangre+ Suplemento+ Inhibidores, etc..  Estos medios son útiles para acelerar el proceso de aislamiento e identificación.  Como un mínimo de medios a utilizar se recomienda la inoculación de la muestra en:  tioglicolato suplementado, y una placa de Agar sangre + Suplemento , en casos de infecciones polimicrobianas se recomienda utilizar además, una placas de Agar Sangre+ Suplemento+ Inhibidores. Los medios selectivos sólidos deben inocularse abundantemente.

Una vez inoculados los medios deben ser incubados en una atmósfera de anaerobiosis, ya sea en una jarra con generadores de gas que operan transformando el O2 en H2 y CO2  una vez que se agrega agua al generador en presencia de un catalizador de paladio.

Alternativamente puede utilizarse una mezcla de gasen en la incubadora que está compuesta por 5-10% de H2, 5-10% CO2, 80-90% N2.

Normalmente los cultivos deben ser incubados por un mínimo de 48 hrs. Algunos anaerobios requieren mayor tiempo, hasta 3 días para tener colonias visibles.

 

TECNICAS DE IDENTIFICACIÓN: Todas las tecnicas de identificación deben partir con un examen de morfología de la colonia y una tinción de Gram para examinar la morfología bacteriana. Existen algunos criterios fundamentales en la identificación de anaerobios como son: Sensibilidad al O2, morfología de la colonia, invasividad, pigmento,hemólisis, movilidad, prod de catalasa,e indol, hidrólisis de almidón, esculina y gelatina, reducción de nitratos y fermentación de carbohidratos( glucosa, manitol, lactosa, ramnosa) crecimiento en bilis, penicilina, rifampicina, kanamicina. Inhibición por polianetolsulfonato y productos metabólicos.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD: Se efectúan con la técnica de microdilución en Caldo Wilkins-Chalgren con inóculo de 10*5 CFU/ml por dilución, incubación por 48hrs en anaerobiosis.